制作如下  ：先在载玻片上滴加一滴生理盐水.把菌落用接种环挑起后,涂于生理盐水中央直径1CM左右要混匀——把载玻片放在酒精灯上加热烘干———滴加草酸铵结晶紫６０秒——水洗——革兰氏碘液６０Ｓ——９５％酒精脱色３０Ｓ——水洗——番红２分钟——干燥镜检。
最终目的是要在显微镜中看见清晰的细菌形状，所以在染色后脱色和水洗最重要，如脱色和水洗不净就会造成细菌和没洗净的颜色混在一起分不清。

     革兰式染色及其原理:上面的就为革兰氏染色步骤，主要针对的是细菌的检验，因为它们极小。其他的如酵母菌等形状很大不用染色。细菌之所以能被染色主要是和它的结构有关，而且有些能被染成蓝色，有些能染成红色，以此来分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌. 对于生物显微镜革兰氏阳性菌它们的细胞结构中脂类含量少，当用结晶紫染色后再用酒精脱色时，将脂类溶解抽提出来，使肽聚糖孔径变小通透性降低，结晶紫不易被抽提出来所以能保持蓝色。对于革兰氏阴性菌它们的肽聚糖少而脂类多，所以酒精很容易把结晶紫染料提取出来，再经过第二次用番红复染时便染上了红色。